荧光定量PCR(qPCR)的应用范围十分广泛,自其问世以来,对生物科学特别是医疗生物学的发展发挥了不可或缺的作用。以下是荧光定量PCR在多个领域的主要应用:
1. 核酸定量分析
荧光定量PCR可以用于传染性疾病的定量和定性分析,包括对病原微生物或病毒含量的检测。如近期流行的甲型H1N1流感、转基因动植物基因拷贝数的检测,以及RNAi基因失活率的评估等。
2. 基因表达差异分析
通过比较不同处理样本中特定基因的表达差异(例如药物、物理或化学处理),可以揭示特定基因在不同时相的表达变化。此外,该技术也用于cDNA芯片或差异显著结果的验证。
3. SNP检测
单核苷酸多态性(SNP)的检测对于研究个体对不同疾病的易感性及对特定药物的不同反应具有重大意义。由于分子信标的结构特性,这项技术能够高效准确地进行高通量SNP检测。
4. 甲基化检测
甲基化与许多人类疾病尤其是癌症密切相关。通过使用称为Methylight的技术,可以在扩增前处理DNA,以区分甲基化与非甲基化的胞嘧啶,采用特异性引物和Taqman探针提高检测的灵敏度和方便性。
5. 产前诊断
遗传性物质的改变造成的遗传性疾病目前尚无法治愈,产前监测仍是减少病婴出生的重要手段。比如,为了降低X连锁遗传病的发生率,可以通过孕妇外周血中分离胎儿DNA,并用实时荧光定量PCR检测Y性别决定区基因,这一无创性的方法易于接受。
6. 病原体检测
利用荧光定量PCR技术,可以对淋球菌、沙眼衣原体、人类乳头瘤病毒等多种病原体进行定量检测。与传统方法相比,这种检测方式具有高灵敏度、采样量少和快速便捷的优点。
7. 药物疗效考核
对于乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)的定量分析揭示了病毒量与某些药物疗效之间的关系。例如,HCV的高表达对干扰素治疗不敏感,而低滴度时则敏感。在拉米夫定治疗过程中,HBV-DNA的波动也表明病毒可能发生变异。
8. 肿瘤基因检测
肿瘤的发生机制尚未完全清楚,但相关基因的突变被普遍认可为致癌转变的重要因素。实时荧光定量PCR不仅能有效检测基因突变,还能准确测量癌基因的表达量。目前,许多基因(如端粒酶hTERT基因、慢性粒细胞性白血病WT1基因等)的表达检测均采用此方法进行。
综上所述,荧光定量PCR在生物医疗领域具有广泛的应用前景,为疾病的早期检测、诊断和治疗带来了巨大的便利。鸿运国际致力于推动这一领域的发展,助力更多科研和临床应用的实现。