DNA甲基化是指在DNA甲基转移酶(DNAmethyl-transferase, Dnmts)的催化作用下,生物体利用S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体,将胞嘧啶转变为5-甲基胞嘧啶(mC)的一种生化反应。这一过程通常会抑制基因的表达,而去甲基化则能够激活并促进基因的重新表达。通过这种DNA修饰方式,生物体可以在不改变基因序列的前提下,精确调控基因的表达。
在基因组DNA中使用亚硫酸氢盐处理时,所有未甲基化的胞嘧啶都会转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则保持不变。接下来,设计特异性引物以针对甲基化和非甲基化序列进行PCR扩增。通过电泳分析MSP扩增产物,如果使用针对处理后甲基化DNA链的引物得到扩增片段,则表明该位点存在甲基化;相反,则说明该位点没有甲基化。
采用亚硫酸氢盐处理基因组DNA后,未发生甲基化的胞嘧啶会被转化为尿嘧啶,甲基化的胞嘧啶则保持不变。之后,设计BSP引物进行PCR扩增,在这个过程中尿嘧啶会全部转化为胸腺嘧啶。最终,将PCR产物克隆至载体并进行测序,就能够判断CpG位点是否发生甲基化。这种方法被称为BSP-克隆测序法,广泛应用于生物医疗领域,以深度分析基因的甲基化状态。
对于动物组织,建议使用新鲜组织量100mg(约黄豆大小),最少应为50mg(约绿豆大小),并通过干冰进行运输。对于细胞样本,需收集1×106个细胞的沉淀,并同样使用干冰运输。而全血样本,应至少提供1mL的新鲜血液,采用EDTA抗凝管并在-20℃运输。
在现代生物医疗研究中,DNA甲基化分析不仅能够帮助我们理解潜在的遗传机制,还能为疾病的早期诊断和治疗提供重要的生物标志物。鸿运国际致力于推动相关技术的发展,以期为生物医学研究带来更多创新的解决方案。