一、用途及原理
该培养基是用于检测金黄色葡萄球菌的。蛋白胨和酵母浸粉提供了细菌生长所需的基本营养成分,磷酸氢二钾作为缓冲剂,甘露醇则作为可发酵的碳源。较高浓度的氯化钠能够抑制不耐盐细菌的生长,而高浓度的硫酸铵则使明胶发生沉淀,从而使培养基呈现不透明状态。金黄色葡萄球菌能够在高渗透环境中生存,并在该培养基中生长,将不溶性的大分子明胶分解为溶性的小分子氨基酸,使得菌落周围的培养基变得透明。此外,金黄色葡萄球菌还能够分解培养基中的甘露醇产生酸,培养结束后,滴加酸碱指示剂可观察到明显的产酸现象。
二、培养基配方(g/L)
- 蛋白胨:100
- 酵母浸出粉:25
- 磷酸氢二钾:50
- 明胶:300
- 甘露醇:100
- 氯化钠:550
- 硫酸铵:750
- 琼脂:150
pH值:7.2±0.2
三、配制方法
称取该培养基成分2025克,加热溶解于1000毫升蒸馏水中,分装后置于121℃条件下高压灭菌15分钟。待冷却至45-50℃时,迅速倾入无菌平皿,备用。注意:由于培养基中含有相对较多的明胶和硫酸铵,灭菌冷却后需摇匀并立即倒平板,以确保平板快速凝固。最终形成的平板应呈均一的浑浊不透明状态。不应长时间在50℃左右保存,以免培养基凝固;在倾注平板前务必摇匀,确保新制成的平板能够快速凝固。如平板呈透明状态,通常是因培养基未摇匀或凝固过程过慢所致。
四、生长现象及结果观察
接种以下质控菌株,在36±1℃下培养18-24小时:
质控菌株 | 菌株编号 | 生长情况 | 其他特征 |
---|---|---|---|
金黄色葡萄球菌 | ATCC25923 | +++ | 菌落周围有透明环,产酸 |
表皮葡萄球菌 | CMCC26069 | +++ | 菌落周围有透明环,不产酸 |
发酵甘露醇的产酸现象观察:用棉签除去平板上的菌落,在琼脂表面滴加0.04%溴酚紫溶液,同时在无菌落生长的空白位置加一滴作为对照。如滴加的溴酚紫变黄,说明该菌能够发酵甘露醇并产生酸。
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